Obtención de la proteína verde fluorescente recombinante y su anticuerpo policlonal Igy

La Proteína Verde Fluorescente (Green Fluorescent Protein, GFP) es ampliamente utilizada en ensayos in vivo e in vitro. Se han generado múltiples variantes de esta proteína para diversificar sus características, como la GFP-enhancer (EGFP) que emite una señal de fluorescencia 35 veces mayor en comparación con la proteína silvestre, siendo implementada como proteína fusión en estudios de localización y estabilidad estructural, entre otros. La detección de esta proteína y sus variantes puede ser directa o indirecta, mediante el uso de anticuerpos anti-GFP. Aunque el uso de GFP es generalizado y de evidente utilidad en investigación y en docencia, los insumos para su estudio exhiben un alto costo dado que deben ser importados, constituyendo un recurso limitado en Colombia. El presente trabajo reporta la clonación y expresión de la proteína recombinante 6xHisEGFP, cuya purificación se completó a partir de la fracción soluble e insoluble del sistema heterólogo Escherichia coli mediante cromatografía de afinidad a metales inmovilizados y electroforesis preparativa, respectivamente. La proteína purificada se implementó como antígeno para la producción de anticuerpos policlonales aviares (IgY) contra la EGFP, los cuales se obtuvieron desde los huevos colectados y el suero de las sangrías de las gallinas inmunizadas. En este sentido, la estrategia metodológica planteada constituye un avance en el desarrollo de un sistema biotecnológico para la producción nacional de herramientas moleculares como los anticuerpos policlonales aviares a bajo costo.

Green Fluorescent Protein (GFP) is widely used in in vivo and in vitro assays. Multiple variants of this protein have been generated to diversify its characteristics, such as the enhancer GFP (EGFP) that emits a 35-fold higher fluorescence signal compared to the wild-type protein, being implemented as a fusion reporter in localization and structural stability studies, among others. Detection of this protein can be direct or indirect, fusing anti-GFP antibodies. Although the use of GFP is generalized and of evident utility in research and teaching, the molecular tools for its study exhibit a high cost since they must be imported, constituting a limited resource in Colombia. This work reports the cloning and expression of the recombinant protein 6xHisEGFP, which purification was completed from the soluble and insoluble fraction of the heterologous Escherichia coli system by immobilized metal affinity chromatography and preparative SDS-PAGE, respectively. The purified protein was implemented as an antigen to produce avian polyclonal antibodies (IgY) against EGFP, which were obtained from collected eggs and blood serum from immunized hens. In this sense, the proposed methodological strategy constitutes an advance in the development of a biotechnological system for the national production of molecular tools such as avian polyclonal antibodies at low-cost.

Escucha activa: base de la relación terapéutica con persona mayor por teleenfermería en contexto pandémico / Active listening: basis of the therapeutic relationship with the elderly person by Telenursing in a pandemic context

El estudio de caso que se presenta a continuación busca resolver el desafío de establecer una relación terapéutica mediante la escucha activa en el contexto remoto de teleenfermería. Para ello se trabajó en un plan de cuidados de enfermería, en base a encuentros remotos con una usuaria de un condominio de viviendas tuteladas por medio de videollamadas, poniendo a prueba la forma en que se realizaba la escucha activa al encontrarse en espacios físicos diferentes. Se realizó una valoración a través de los 11 patrones funcionales de Gordon, priorizando las necesidades detectadas en la usuaria y estableciendo objetivos e intervenciones. Dentro de los resultados obtenidos se destaca que, al existir una óptima metodología de trabajo y retroalimentaciones constantes junto con un buen uso del tiempo, se puede lograr a cabalidad la escucha activa por medio de la teleenfermería a pesar de estar en espacios físicos diferentes. Esto último permite el establecimiento de una relación terapéutica entre el profesional de enfermería y la persona. Se concluye que la teleenfermería es un recurso valioso que es necesario continuar trabajando para que las diferencias entre una atención presencial y una atención remota sean cada vez mínimas[AU]

The case study presented below seeks to resolve the challenge of establishing a therapeutic relationship through active listening in the remote context of tele-nursing. To this end, we worked on a nursing care plan, based on remote meetings with a user of a supervised housing condominium by means of video calls, testing the way in which active listening was carried out when they were in different physical spaces. An assessment was carried out through Gordon's 11 functional patterns, prioritizing the needs detected in the user and establishing objectives and interventions. Among the results obtained, it stands out that, with an optimal work methodology and constant feedback together with a good use of time, active listening can be fully achieved by means of teleconferencing despite the fact that they are in different physical spaces. The latter allows the establishment of a therapeutic relationship between the nurse and the person. It is concluded that tele-nursing is a valuable resource that needs to be further developed so that the differences between face-to-face and remote care become increasingly minimal[AU]

O estudo de caso apresentado abaixo procura resolver o desafio de estabelecer uma relação terapêutica através da escuta activa no contexto remoto da tele-nursão. Para o efeito, trabalhámos num plano de cuidados de enfermagem, baseado em reuniões remotas com um utilizador de um condomínio habitacional supervisionado através de videochamadas, testando a forma como a escuta activa era realizada quando se encontravam em diferentes espaços físicos. Foi feita uma avaliação através dos 11 padrões funcionais de Gordon, dando prioridade às necessidades detectadas no utilizador e estabelecendo objectivos e intervenções. Entre os resultados obtidos, destaca-se que, com uma metodologia de trabalho óptima e um feedback constante juntamente com uma boa utilização do tempo, a escuta activa pode ser plenamente alcançada por meio de teleconferência, apesar de se encontrarem em espaços físicos diferentes. Este último permite o estabelecimento de uma relação terapêutica entre a enfermeira e a pessoa. Conclui-se que a tele-nurmagem é um recurso valioso que precisa de ser mais desenvolvido para que as diferenças entre cuidados presenciais e remotos se tornem cada vez mais mínimas[AU]

Colombian vs. American corn: Quality, chemical composition, mycotoxin content and metabolizable energy

Background: Corn is, quantitatively, one of the most important world crops (ranking second only after wheat) and a key ingredient in animal feeds. Objective: to assess and compare corn quality, mycotoxin content, chemical composition and apparent metabolizable energy (AME) of domestic and imported corn. Methods: Grain quality (USDA grading system) was determined in 30 samples of domestic and 21 samples of imported corn. From each origin, 15 samples were subjected to proximal analysis and 10 were used to determine fatty acid composition. Mycotoxin analysis was conducted on 30 samples of domestic and 23 of imported corn. Results: six of the 30 domestic samples corresponded to US1 grade (highest quality) vs. none of the imported. In the "sample grade" category (lowest quality), 10 and 6 samples corresponded to imported and domestic corn, respectively. Soybeans were found as contaminant in 15 of the 21 imported corn samples. Aspergillus spp. mycotoxins such as ochratoxin A were not detected, and aflatoxins were found in only a few samples at very low levels. Fusariotoxins such as deoxynivalenol and zearalenone were found in 61 and 43% of imported samples, respectively, but in none of the domestic samples. Domestic corn had lower carbohydrate content compared with imported corn (85.4 vs. 86.7%), but higher crude fat (3.8 vs. 3.1%). The AME values for domestic and imported corn were 3,697 and 3,378 kcal/kg, respectively. The fatty acid profiles from both corn types were similar. Conclusion: This study found significant differences between locally-grown and imported corn, particularly in terms of crude fat, AME content, fusariotoxins, and contaminant seeds (soybeans). These findings suggest that locally-grown corn might have nutritional and toxicological advantages over corn imported from the United States.

Antecedentes: El maíz es, cuantitativamente, uno de los cultivos más importantes a nivel mundial (ocupa el segundo lugar después del trigo) y uno de los principales ingredientes en dietas para animales. Objetivo: Evaluar y comparar la calidad del maíz, su contenido de micotoxinas, composición química, y energía metabolizable aparente (AME) del maíz nacional e importado. Métodos: La calidad del grano (sistema de clasificación de la USDA) se determinó en 30 muestras de maíz producido en Colombia y 21 de maíz importado. De cada origen, 15 muestras se sometieron a análisis proximal y 10 se analizaron para determinar el perfil de ácidos grasos. El contenido de micotoxinas se determinó en 30 muestras de maíz nacional y 23 de maíz importado. Resultados: Seis de las treinta muestras nacionales analizadas para calidad de grano correspondieron a grado US1 (la mejor calidad) frente a ninguna de las importadas. En categoría "grado muestra" (la menor calidad) se encontraron 10 y 6 de las muestras de maíz importado y nacional, respectivamente; 15 de las 21 muestras de maíz importado presentaron contaminación con semillas de fríjol soya. No se encontraron micotoxinas de hongos Aspergillus spp. (ocratoxina A), y niveles muy bajos de aflatoxinas en unas pocas muestras. Fusariotoxinas tales como deoxinivalenol y zearalenona se detectaron en el 61 y 43% de las muestras de maíz importado, respectivamente, pero en ninguna muestra de maíz nacional. El maíz nacional presentó menor contenido de carbohidratos (85,4 vs. 86,7%), pero mayor contenido de grasa cruda (3,8 vs. 3,1%) en comparación con el importado, respectivamente. Los valores de AME fueron de 3.697 y 3.378 kcal/kg para el maíz nacional e importado, respectivamente. El perfil de ácidos grasos de ambas procedencias fue similar. Conclusiones: Este estudio encontró diferencias significativas entre el maíz de producción nacional y el importado, en especial en su contenido de grasa cruda y AME, fusariotoxinas, y semillas contaminates (soya). Estos hallazgos sugieren que el maíz de producción nacional puede presentar ventajas de tipo nutricional y toxicológico frente al maíz importado de los Estados Unidos de América.

Antecedentes: O milho é quantitativamente uma das culturas mais importantes em nível mundial (ocupando o segundo lugar depois do trigo), sendo um dos principais ingredientes em dietas para animais. Objetivo: Avaliar e comparar a qualidade do milho, o teor de micotoxinas, a composição química e a energia metabolizável aparente (EMA) do milho nacional e importado. Métodos: A qualidade do grão (sistema de classificação do USDA) foi determinada em 30 amostras de milho produzido na Colômbia e 21 amostras de milho importado. Quinze amostras de cada tipo de milho foram submetidas a análise proximal e dez amostras de cada milho foram analisadas para determinar o perfil de ácidos graxos. O conteúdo de micotoxinas foi determinado em 30 amostras de milho da Colômbia e em 23 amostras de milho importado. Resultados: Seis das trinta amostras colombianas analisadas para qualidade de grão corresponderam a grau US1 (melhor qualidade) frente a nenhuma das amostras importadas. Na categoria "grau amostra" (menor qualidade) foram encontradas 10 e 6 amostras de milhos importados e colombianos, respectivamente; Quinze das 21 amostras de milho importado apresentaram contaminação com sementes de feijão soja. Não foram encontradas micotoxinas de fungos Aspergillus spp. (ocratoxina A) ou apenas níveis muito baixos em poucas amostras (aflatoxinas). As fusariotoxinas, deoxinivalenol e zearalenona foram detectadas em 61 e 43% das amostras de milho importado, respectivamente, mas não foram detectadas em nenhuma amostra do milho colombiano. O milho colombiano apresentou menor conteúdo de carboidratos (85,4 vs. 86,7%) porém maior conteúdo de gordura crua (3,8 vs. 3,1%). Os valores de AME foram 3.697 e 3.378 kcal/kg para as amostras de milho colombiano e importado, respectivamente. O perfil de ácidos graxos de ambos tipos de milho foi similar. Conclusões: Os resultados do presente estudo mostram diferenças significativas entre o milho de origem colombiana e o milho importado dos Estados Unidos, em especial no conteúdo de gordura crua e AME, fusariotoxinas e sementes contaminantes (soja). Estes achados sugerem que o milho de produção colombiana pode apresentar vantagens de tipo nutricional e toxicológica frente ao milho importado dos Estados Unidos.

Identificación de una triparedoxina peroxidasa citoplasmática en Leishmania braziliensis / Identification of a cytoplasmic tryparedoxin peroxidase from Leishmania braziliensis / Identificação de uma triparedoxina peroxidase citoplasmica de Leishmania braziliensis

Resumen Los sistemas de defensa anti-oxidante utilizados por el parásito intracelular Leishmania braziliensis durante el proceso de infección permiten eliminar especies reactivas de oxígeno y nitrógeno a expensas de equivalentes reductores derivados de la tripanotiona, evitando daños celulares del patógeno. Con el objetivo de identificar potenciales blancos moleculares para el desarrollo de fármacos contra este parásito, se realizó la detección de la enzima triparedoxina peroxidasa citoplasmática de L. braziliensis (LbTXNPxII), la cual es esencial para disminuir concentraciones tóxicas de peróxido de hidrógeno en el contexto de infección. Para esto se generaron anticuerpos policlonales en modelo aviar, partiendo de la clonación, expresión y purificación de la proteína recombinante 6xHis-SUMO-LbTXNPxII (37kDa) en el sistema heterólogo Escherichia coli. La proteína purificada se utilizó como antígeno para la producción de anticuerpos IgY, cuya implementación en estudios in situ permitió detectar y localizar la enzima LbTXNPxII endógena (22kDa) en el citoplasma de promastigotes fijados y verificar su interacción molecular con la nicotinamida/ nicotinato mononucleótido adenilil transferasa, enzima involucrada en la síntesis del NAD. De este modo, se reporta el desarrollo de una herramienta bioquímica para la identificación y estudio de la enzima LbTXNPxII y su participación en vías del metabolismo energético y de defensa anti-oxidante.

Abstract The antioxidant defense systems used by the intracellular parasite Leishmania braziliensis during the infection process make it possible to eliminate reactive oxygen and nitrogen species at the expense of reducing equivalents derived from trypanothione, avoiding cellular damage of the pathogen. In order to identify potential molecular targets for the development of drugs against this parasite, the cytoplasmic tryparedoxin peroxidase of L. braziliensis (LbTXNPxII), which is essential to reduce toxic concentrations of hydrogen peroxide in the context of infection, was carried out. In this regard, polyclonal antibodies were generated in an avian model, starting from the cloning, expression, and purification of the recombinant protein 6xHis-SUMO-LbTXNPxII (37kDa) in the heterologous system of Escherichia coli. The purified protein was used as an antigen for the production of IgY antibodies, whose implementation in in situ experiments allowed the detection and localization of the endogenous LbTXNPxII enzyme (22kDa) in the cytoplasm of fixed promastigotes, as well as the verification of its molecular interaction with nicotinamide/nicotinate mononucleotide adenylyltransferase, an enzyme involved in the synthesis of NAD. Thus, the development of a biochemical tool for the identification and study of the LbTXNPxII enzyme and its participation in energy metabolism and antioxidant defense pathways is reported.

Resumo Os sistemas de defesa antioxidante utilizados pelo parasita intracelular Leishmania braziliensis durante o processo de infecção, permitem a eliminação de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio em detrimento de equivalentes redutores derivados de tripanotiona, evitando o dano celular do patógeno. Com o objetivo de identificar potenciais alvos moleculares para o desenvolvimento de drogas contra esse parasita, foi detectada a enzima citoplasmática triparedoxina peroxidase de L. braziliensis (LbTXNPxII), essencial para reduzir as concentrações tóxicas de peróxido de hidrogênio no contexto de infecção. Para isso, anticorpos policlonais foram gerados em modelo aviário, a partir da clonagem, expressão e purificação da proteína recombinante 6xHis-SUMO-LbTXNPxII (37kDa) no sistema heterólogo de Escherichia coli. A proteína purificada foi utilizada como antígeno para a produção de anticorpos IgY, cuja implementação em experimentos in situ permitiu a detecção e localização da enzima LbTXNPxII endógena (22kDa) no citoplasma de promastigotas fixos e verificar sua interação molecular com nicotinamida/nicotinato mononucleotídeo adenililtransferase, enzima envolvida na síntese de NAD. Assim, é relatado o desenvolvimento de uma ferramenta bioquímica para a identificação e estudo da enzima LbTXNPxII e sua participação no metabolismo energético e nas vias de defesa antioxidante.

Recomendaciones para la implementación de soporte respiratorio pediátrico en COVID-19. Kinesiología Intensiva y Terapia Respiratoria Pediátrica de Chile / Recommendations for the implementation of pediatric respiratory support in COVID-19. Intensive Kinesiology and Respiratory Therapy Chilean

Resumen: De acuerdo a la información disponible, los pacientes pediátricos con COVID-19 tendrían una me nor frecuencia, se presentarían en su mayoría con un cuadro clínico de leve a moderado, y con una baja tasa de morbimortalidad asociada5. Sin embargo, es incierto el comportamiento real que tendrá el SARS-CoV-2 en Chile, así como tampoco sabemos el impacto que tendrá su interacción con otros virus respiratorios en el desenlace clínico. Asumiendo que los pacientes pediátricos que requieran hospitalización por sospecha o confirmación de COVID-19 necesitarán de diferentes niveles de so porte respiratorio, hemos elaborado recomendaciones transversales fundamentadas en el óptimo manejo del apoyo respiratorio pediátrico, basados en los principios de calidad y eficiencia en la en trega del soporte, en parámetros de bioseguridad y en el uso apropiado de recursos6. Estos elementos que se encuentran relacionados al armado y filtrado de los aerosoles producidos por algunos equipos de soporte ventilatorio, son recomendados en esta guía con el fin de unificar criterios técnicos que permitan entregar un apoyo óptimo al paciente pediátrico, manteniendo la mayor bioseguridad po sible para el paciente y el equipo de salud.

Abstract: According to the available information, pediatric cases of COVID-19 would present less frequently, most of them with mild to moderate clinical picture, and low associated morbidity and mortality5. However, we do not know the actual behavior that SARS-CoV-2 will have in Chile, nor the impact that its interaction with other respiratory viruses will have on the clinical outcome. On the assump tion that pediatric patients requiring hospitalization due to suspicion or confirmation of COVID-19 will need different levels of respiratory support, we have developed wide-range recommendations based on the optimal management of pediatric respiratory support according to the principles of quality and efficiency in the delivery of support, biosafety parameters, and appropriate use of resou rces6. These elements, which are related to assembling and filtering the aerosols produced by some respiratory support equipment, are recommended in this guide in order to unify technical criteria that allow optimal support for the pediatric patient while maintaining the highest possible biosafety for the patient and the health team.

Protocolo de resonancia magnética de manos en diagnóstico precoz de artritis reumatoide: ¿por qué? ¿cómo? ¿para qué?

Conventional radiography of hands has been the imaging technique used for the early diagnosis of rheumatoid arthritis, considering its easy access and ability to reveal structural damage. However, it does not provide information about inflammatory activity or prognosis of this disease. On the other hand, magnetic resonance imaging is becoming the technique of choice for the early diagnosis of this disease and for the assessment of treatment response. It has a better sensitivity for the detection of inflammatory findings that cannot be identified with physical examination, analytical and conventional imaging techniques. This article reports the imaging protocol for magnetic resonance of the hands used at our institution for the diagnosis and follow-up of patients with rheumatoid arthritis. We also review the main imaging findings of the disease.

Neumonía bacterémica por Neisseria meningitidis: primer caso reportado en Chile y revisión bibliográfica / Neisseria meningitidis pneumonia. a case report

Few cases of bacteremic pneumonia by Neisseria meningitidis (NM) have been described worldwide; mostly in elderly patients or those with comorbidities. They appear clinically indistinguishable from other acute infectious pneumoniae, that do not develope the syndrome of meningococcemia. We report a 17-years-old male, without prior medical history, consulting in the emergency department with a 7-day history of productive cough, right pleural pain, fever and dyspnea. He was admitted to the ICU due to septic shock and respiratory distress. He was managed with vasoactive drugs and prone positioning ventilation for 48 hours. Chest radiography showed a right superior lobe condensation. The electrocardiogram and echocardiogram suggested septic myocarditis. Blood cultures demonstrated the presence of serogroup W135-NM. A lumbar puncture ruled out meningitis, and a 10-day ceftriaxone therapy was completed favorably.

Detection of Ptaquilosides in different phenologic stages of Bracken fern (Pteridium aquilinum) and analysis of mik samples in farms with hematuria in Tolima, Colombia / Detección de ptaquilósido en diferentes estados fenológicos de "helecho macho" (Pteridium aquilinum) y análisis de muestras de leche en granjas con hematuria en Tolima, Colombia / Detecção da ptaquilosida em diferentes estágios fenológicos da samambaia (Pteridiumaquilinum) e análise de amostras de leite em fazendas com hematúria em Tolima, Colômbia

Bracken fern or "Helecho Macho" (Pteridium aquilinum) is one of the most common weeds in the meadows of the mountain ranges of Colombia. Consumption of this palatable plant by bovines causes a disease known as bovine enzootic hematuria and esophageal neoplasia. The toxic effect of the plant in bovines is caused by the ptaquiloside, main carcinogenic toxin of this plant. In this study, eight samples of Bracken fern in different phenologic stages and 16 milk samples collected in two towns of Tolima, Líbano and Murillo, were analized. In both cases, Highperformance liquid cromatography (HPLC) coupled with Mass Spectrometry (MS) was used. In all Bracken fern samples analized, detectable levels of ptaquilosides were observed, ranging from 23 to 1194 µg/g, with a 342 µg/g mean. No detectable levels of ptaquilosides were found in the milk samples. The results show a great variation in the content of ptaquilosides depending on the phenologic stage and collection site of the plant. It is posible that the reported instability of the ptaquiloside and the processing given to the milk samples could have caused the lack of detection of the compound in milk

El "helecho macho" (Pteridium aquilinum) es una de las malezas más comunes en praderas de la región de cordillera en Colombia. El consumo de esta planta palatable por parte de los bovinos causa una enfermedad conocida como hematuria enzoótica bovina y neoplasias de esófago. El efecto tóxico de la planta en los bovinos es causado por el ptaquilósido, principal toxina carcinogénica de esta planta. En el presente estudio se analizaron ocho muestras en diferentes estados fenológicos del helecho obtenidas en dos municipios del departamento del Tolima (Líbano y Murillo) y 16 muestras de leche de la misma zona. En ambos casos se utilizó como técnica analítica cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) acoplada a espectrometría de masas (MS). En todas las muestras analizadas se observaron niveles detectables de ptaquilósido, con un rango de 23 a 1.194 µg/g y un promedio de 342 µg/g. No se encontraron niveles detectables de ptaquilósido en ninguna de las muestras de leche. Los resultados del estudio muestran la gran variación en el contenido de ptaquilósido dependiendo del estado fenológico de la planta y del sitio de colecta. Es posible que la reportada inestabilidad del ptaquilósido y el tipo de procesamiento dado a las muestras de leche haya ocasionado la no detección del compuesto en las mismas.

A samambaia (Pteridium aquilinum) é uma das ervas daninhas mais comuns nas pastagens na região de cordilheira na Colômbia. O consumo desta planta palatável para os bovinos, causa uma doença conhecida como hematúria enzoótica bovina e neoplasias de esôfago. O efeito tóxico da planta nos bovinos é causado pelo ptaquilosídeo, principal toxina carcinogênica desta planta. No presente estudo foram analisadas oito amostras em diferentes estágios fenológicos da samambaia e 16 amostras de leite obtidas em dois municípios do departamento de Tolima (Líbano e Murillo). Em ambos os casos foi utilizada como técnica analítica a cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) acoplada a espectrometria de massas (MS). Em todas as amostras analisadas foram observados níveis detectáveis de ptaquilosídeo, com um rango de 23 a 1.194 µg/g e uma média de 342 µg/g. Não foram encontrados níveis detectáveis de ptaquilosídeo em nenhuma das amostras de leite. Os resultados do estudo mostram a grande variação no conteúdo de ptaquilosídeo dependendo do estágio fenológico da planta e do local da coleta. É possível que a reportada instabilidade do ptaquilosídeo e o tipo de processamento dado às amostras de leite seja a causa da falta de detecção do composto nas amostras de leite analisadas.

Registro de síndromes coronarios agudos sin elevación del segmento ST en un centro hospitalario de tercer nivel de atención (estudio RESCATA-SEST) / Registry of non-ST elevation acute coronary syndromes in a tertiary hospital (RESCATA-SEST registry)

Objetivo: Describir el perfil clinicoepidemiológico y el proceso de atención del síndrome coronario agudo sin elevación del segmento ST en un hospital de tercer nivel. Método: Se analiza la información clínica, la estratificación de riesgo, la terapia de revascularización y los hábitos de prescripción al egreso de los casos con síndrome coronario agudo sin elevación del segmento ST atendidos en un año. Resultados: Se incluyeron 283 pacientes con una edad media de 58 años; el 63%, masculino. La mayoría (88.6%) de los casos ocurrió entre los 50 y 59 años. La hipertensión arterial fue el factor de riesgo predominante. El 82.5% de los sujetos tuvo índice TIMI de riesgo bajo-intermedio. En el 37% de los pacientes hubo isquemia residual y en 80 (70%) se demostraron obstrucciones coronarias. Setenta y dos pacientes (90%) fueron revascularizados con stent, principalmente farmacológico (87.5%). Más del 90% de los casos recibió estatina y antiplaquetarios al egreso; otros medicamentos se indicaron en poco más del 50%. Conclusiones: En la población estudiada, el síndrome coronario agudo sin elevación del ST predomina en hombres relativamente jóvenes e hipertensos. Estratificar el riesgo, buscar isquemia residual y revascularizar con stent farmacológico son prácticas comunes; el cumplimiento de las recomendaciones basadas en la evidencia es subóptimo.

Objective: To describe the clinical-epidemiologic profile and the process of care of the non-ST elevation acute coronary syndromes in a tertiary hospital. Method: We analyzed the clinical information, the risk stratification and diagnostic methods, the revascularization therapy and the prescription trends at discharge, of patients with non-ST elevation acute coronary syndromes cared for in one year. Results: Two hundred and eighty-three patients with mean age of 58 years were included (63% men). The largest number of non-ST elevation acute coronary syndromes (88.6%) was found between 50 to 59 years of age. The most common risk factor was hypertension; 82.5% of the patients had a low-intermediate TIMI score; residual ischemia was demonstrated in 37% and coronary obstructions were seen in 80 patients (70%). In 90%, a percutaneous coronary intervention was performed, mainly with drug-eluting Stents (87.5%). At discharge, even though antiplatelet agents and statins were prescribed in more than 90%, other drugs were indicated in a few more than 50% of patients. Conclusions: In this population, non-ST elevation acute coronary syndromes predominates in relatively young men, often with hypertension. To stratify risk, to look for residual ischemia and to revascularize with drug-eluting stents are common practices, but the evidence-based guidelines compliance is still suboptimal.

Hemofiltração de alto volume e ventilação em posição prona em hemorragia subaracnóidea complicada por grave síndrome do desconforto respiratório agudo e choque séptico refratário / High-volume hemofiltration and prone ventilation in subarachnoid hemorrhage complicated by severe acute respiratory distress syndrome and refractory septic shock

Relatamos o tratamento bem-sucedido de dois pacientes com hemorragia subaracnóidea complicada com grave falência respiratória e choque séptico refratário, utilizando, simultaneamente, ventilação em posição prona e hemofiltração de alto volume. Esses tratamentos de resgate permitiram que os pacientes superassem a grave situação sem complicações associadas ou efeitos deletérios na pressão intracraniana e de perfusão cerebral. A ventilação em posição prona é, hoje, um tratamento aceito para síndrome de desconforto respiratório agudo grave, e a hemofiltração de alto volume é um suporte hemodinâmico não convencional, que tem diversos mecanismos potenciais para melhorar o choque séptico. Neste artigo revisamos brevemente esses tratamentos e as evidências relacionadas. Quando outras terapias convencionais são insuficientes para proporcionar oxigenação e perfusão como parte do cuidado neuroprotetor básico dentro de limites seguros em pacientes com hemorragia subaracnóidea, esses tratamentos de resgate podem ser considerados caso a caso por uma equipe com experiência em cuidados críticos.

We report the successful treatment of two patients with aneurismal subarachnoid hemorrhage complicated by severe respiratory failure and refractory septic shock using simultaneous prone position ventilation and high-volume hemofiltration. These rescue therapies allowed the patients to overcome the critical situation without associated complications and with no detrimental effects on the intracranial and cerebral perfusion pressures. Prone position ventilation is now an accepted therapy for severe acute respiratory distress syndrome, and high-volume hemofiltration is a non-conventional hemodynamic support that has several potential mechanisms for improving septic shock. In this manuscript, we briefly review these therapies and the related evidence. When other conventional treatments are insufficient for providing safe limits of oxygenation and perfusion as part of basic neuroprotective care in subarachnoid hemorrhage patients, these rescue therapies should be considered on a case-by-case basis by an experienced critical care team.

Producción y purificación de anticuerpos aviares (IgYs) a partir de cuerpos de inclusión de una proteína recombinante central en el metabolismo del NAD+ / Production and purification of avian antibodies (IgYs) from inclusion bodies of a recombinant protein central in NAD+ metabolisim / Produção e purificação de anticorpos aviários (IgYs) empregando os corpos de inclusão de uma proteína recombinante importante para o metabolismo do NAD+

El uso de gallinas para la producción de anticuerpos policlonales, reduce la intervención animal, obteniendo además una gran cantidad de anticuerpos. Las aves presentan mayor distancia filogenética entre sus antígenos y los de mamíferos ofreciendo altos porcentajes de anticuerpos específicos. La producción de anticuerpos requiere antígenos en cantidades considerables, por ello es creciente el uso de proteínas recombinantes para tales fines. No obstante, la obtención de proteínas en sistemas heterólogos conduce frecuentemente a la precipitación en agregados insolubles de limitada utilidad (cuerpos de inclusión). Este trabajo presenta una metodología para la producción de anticuerpos policlonales (IgYs) empleando cuerpos de inclusión (CI) como antígeno. Los CI purificados e inoculados corresponden a la Nicotinamida / Nicotinato Mononucleotido Adenililtranferasa (His-GiNMNAT) de Giardia intestinalis expresada en Escherichia coli. La purificación del antígeno se llevó a cabo mediante solubilización y renaturalización. Los anticuerpos se purificaron de la yema de huevo de gallinas imunizadas mediante dilución en agua, seguida de precipitación con sulfato de amonio al 60% y afinidad tiofilica. Los anticuerpos fueron evaluados mediante inmunoblot empleando la proteína His-GiNMNAT. De una yema de huevo se obtuvieron 14,4 mg de IgYs, con alta pureza y con un reconocimiento de hasta 15ng de His-GiNMNAT. Se mejoró la especificidad de los IgYs mediante una purificación adicional por afinidad al antígeno, lo cual permitiría su empleo para el reconocimiento de la proteína del parásito.

In contrast with other animal models, the use of hens for polyclonal antibodies production not only reduces animal intervention, but also increases the quantity of the obtained immunoglobulins. The phylogenetic distance between birds and mammals, leads to more specific avian antibodies than their mammalian counterparts. Since a large amount of antigen is required for avian antibody production, the use of recombinant proteins for this procedure has been growing faster over the last years. Nevertheless, recombinant protein production through heterologous systems, frequently leads to the formation of insoluble and useless aggregates (inclusion bodies, IC). This article presents a strategy to produce avian polyclonal antibodies (IgYs) from IC. In order to obtain the antigen, the Giardia intestinalis nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase recombinant protein (His-GiNMNAT) was expressed in Escherichia coli. The His-GiNMNAT protein was purified through IC solubilization and re-folding. The purified protein was use to immunize hens. The antibodies were purified from egg yolk by water dilution, followed by ammonium sulfate precipitation and thiophilic affinity chromatography. Specificity of the purified antibodies was tested against the His-GiNMNAT protein through Western blot essays. In terms of yield, 14.4 mg of highly pure IgYs were obtained from one egg yolk; these antibodies were able to detect 15 ng of antigen. IgYs specificity was improved by means of antigen affinity purification, allowing its implementation for endogenous detection of GiNMNAT protein in G. intestinalis.

A utilização de galinhas para a produção de anticorpos policlonais, diminui a intervenção sobre o animal e permite a geração de grandes quantidades de anticorpos. As aves têm maior distância filogenética entre os seus antígenos em comparação com os mamíferos, oferecendo altos porcentagens de anticorpos específicos. A produção de anticorpos requerem quantidades consideráveis de antigénio, por conseguinte, é comum a utilização de proteínas recombinantes para esta finalidade. No entanto, a produção de proteínas em sistemas heterólogos muitas vezes leva à precipitação em agregados insolúveis de utilidade limitada (corpos de inclusão). Este trabalho apresenta uma metodologia para a produção de anticorpos policlonais, utilizando proteína recombinante a partir de corpos de inclusão. O antígeno utilizado foi a proteína Nicotinamida / Nicotinato Mononucleótido Adenililtranferasa de Giardia intestinalis gerada em Escherichia coli (His-GiNMNAT). A purificação do antigénio foi feita por solubilização e renaturalização. Os anticorpos foram purificados a partir da gema de ovo de galinhas imunizadas pelo método de diluição em água, seguido de precipitação com sulfato de amónio (60%) e afinidade tiofilica. Os anticorpos foram avaliados por imunoblot utilizando a proteína His-GiNMNAT. De uma gema de ovo foram obtidos 14,4 mg de IgYs com pureza elevada. Estes anticorpos podem reconhecer até 15 ng de His-GiNMNAT. A especificidade dos IgYs foi reforçada por outra purificação por afinidade pelo antigénio. Isto irá permitir a sua utilização para o reconhecimento da proteína do parasita.